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設置熒光分光光度計的狹縫要注意哪些事項

發(fā)布日期: 2020-11-26
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  熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數,從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況。通過對這些參數的測定,不但可以做一般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構象變化,從而闡明分子結構與功能之間的關系。熒光分光光度計的激發(fā)波長掃描范圍一般是190~650nm,發(fā)射波長掃描范圍是200~800nm??捎糜谝后w、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描。
  熒光強度跟很多因素有關,如分子結構、存在狀態(tài)、溶液濃度或薄膜厚度、溫度、選擇的激發(fā)波長、測試狹縫寬度等因素。熒光強度在不同儀器上的測量值存在較大差異,不具有可比性,但是其峰位還是較容易確定的,可以用來判斷何種物質。進行熒光定量分析,必須固定一些條件。
  狹縫的大小對熒光強度很重要,狹縫大小可根據你所測物質的熒光強度大小作出適當的調整。在同一濃度,如熒光強度過大,超過儀器量程,可減小狹縫。但是,需要指出的是,不能僅憑狹縫的大小來改變熒光強度,還要考慮分辨率的問題。對于熒光掃描而言,狹縫加大可以使熒光強度提高同時重現性得到提高,但是分辨率隨之降低。狹縫決定分辨率,儀器其它結構已經固定(光柵的刻線數、焦距以及綜合的線色散系數),狹縫大小就決定分辨率的高低。對于實際使用,狹縫大小需要和測定的峰的半峰寬相匹配,過大,峰就變形了。狹縫大小也決定了光通量大小。按照經驗數值,狹縫開大1倍,光通量將增大4倍。  
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